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透射電鏡實驗技術簡要介紹

釋出時間✘₪:2022-09-08 00:00:00       點選次數✘₪:1882

  透射電鏡實驗技術簡要介紹
  樣本製備方法✘₪:
  由於電鏡電子束穿透能力的限制•╃☁▩₪,必須把標本切成厚度小於0.1um以下的薄片才適用•╃☁▩₪,這種薄片稱為超薄切片▩✘╃₪│。常用的超薄切片厚度是50-70nm▩✘╃₪│。
  在透射電鏡的樣品製備方法中•╃☁▩₪,超薄切片技術是最基本•☁₪₪、最常用的製備技術▩✘╃₪│。超薄切片的製作過程基本上和石蠟切片相似•╃☁▩₪,需要經過取材•☁₪₪、固定•☁₪₪、脫水•☁₪₪、浸透•☁₪₪、包埋聚合•☁₪₪、切片及染色等步驟▩✘╃₪│。
  一取材的基本要求
  組織從生物活體取下以後•╃☁▩₪,如果不立即進行適當處理•╃☁▩₪,會由於細胞內部各種酶的作用•╃☁▩₪,出現細胞自溶現象▩✘╃₪│。此外•╃☁▩₪,還可能由於汙染•╃☁▩₪,微生物在組織內繁殖使細胞的微細結構遭受破壞▩✘╃₪│。因此•╃☁▩₪,為了使細胞結構儘可能保持生前狀態•╃☁▩₪,必須做到快•☁₪₪、小•☁₪₪、準•☁₪₪、冷✘₪:
  (1).動作迅速•╃☁▩₪,組織從活體取下後應在最短時間內(爭取在1分鐘內)投入2.5%戊二醛固定液▩✘╃₪│。
  (2).所取組織的體積要小•╃☁▩₪,一般不超過1mm×1mm×1mm▩✘╃₪│。也可將組織修成1mm×1mm×2mm大小長條形▩✘╃₪│。因為固定劑的滲透能力較弱•╃☁▩₪,組織塊如果太大•╃☁▩₪,塊的內部將不能得到良好的固定▩✘╃₪│。
  (3).機械損傷要小•╃☁▩₪,解剖器械應鋒利•╃☁▩₪,操作宜輕•╃☁▩₪,避免牽拉•☁₪₪、挫傷與擠壓▩✘╃₪│。
  (4).操作最好在低溫(0℃~4℃)下進行•╃☁▩₪,以降低酶的活性•╃☁▩₪,防止細胞自溶▩✘╃₪│。
  (5).取材部位要準確▩✘╃₪│。
  取材方法✘₪:將取出的組織放在潔淨的蠟版上•╃☁▩₪,滴一滴預冷的固定液•╃☁▩₪,用兩片新的•☁₪₪、鋒利的刀片成“拉鋸式”將組織切下並修小•╃☁▩₪,然後用牙籤或鑷子將組織塊移至盛有冷的固定液的小瓶中▩✘╃₪│。如果組織帶有較多的血液和組織液•╃☁▩₪,應先用固定液洗幾遍•╃☁▩₪,然後再切成小塊固定▩✘╃₪│。

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