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細胞免疫熒光的具體實驗步驟介紹

釋出時間☁◕·•:2022-09-08 00:00:00       點選次數☁◕·•:1636

  細胞免疫熒光主要用於蛋白定位研究和細胞內訊號轉導✘☁↟✘,細胞免疫熒光技術是利用免疫技術和熒游標記技術相結合✘☁↟✘,原理就是利用抗原-抗體反應之後✘☁↟✘,採用熒游標記✘☁↟✘,標記完成後✘☁↟✘,顯微鏡下觀察細胞內某種抗原成分的多少✘☁↟✘,從而做出一個定位研究✘☁↟✘,也可以為細胞內訊號傳導提供一個明確的指導✘☁↟✘,細胞免疫熒光具有敏感性強▩│•╃、特異性高▩│•╃、速度快的特點✘☁↟✘,是目前比較常用的組織學技術✘☁↟✘,也是比較精確的☁╃↟·↟。
  細胞免疫熒光實驗步驟☁◕·•:
  首日☁◕·•:
  1.在培養板中將已爬好細胞的玻片用PBS浸洗3次✘☁↟✘,每次3min;
  2.用4%的多聚甲醛固定爬片15min✘☁↟✘,PBS浸洗玻片3次✘☁↟✘,每次3min;
  3.0.5%TritonX-100(PBS配製)室溫通透20min(細胞膜上表達的抗原省略此步驟);
  4.PBS浸洗玻片3次✘☁↟✘,每次3min✘☁↟✘,吸水紙吸乾PBS✘☁↟✘,在玻片上滴加正常山羊血清✘☁↟✘,室溫封閉30min;
  5.吸水紙吸掉封閉液✘☁↟✘,不洗✘☁↟✘,每張玻片滴加足夠量的稀釋好的一抗並放入溼盒✘☁↟✘,4℃孵育過夜;
  次日☁◕·•:
  6.加熒光二抗☁◕·•:PBST浸洗爬片3次✘☁↟✘,每次3min✘☁↟✘,吸水紙吸乾爬片上多餘液體後滴加稀釋好的熒光二抗✘☁↟✘,溼盒中20-37℃孵育1h✘☁↟✘,PBST浸洗切片3次✘☁↟✘,每次3min;注意☁◕·•:從加熒光二抗起✘☁↟✘,後面所有操作步驟都儘量在較暗處進行☁╃↟·↟。
  7.復染核☁◕·•:滴加DAPI避光孵育5min✘☁↟✘,對標本進行染核✘☁↟✘,PBST5minx4次洗去多餘的DAPI;8.用吸水紙吸乾爬片上的液體✘☁↟✘,用含抗熒光淬滅劑的封片液封片✘☁↟✘,然後在熒光顯微鏡下觀察採集影象☁╃↟·↟。

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