心肌缺血再灌注損傷與心肌細胞

研究背景

急性心肌梗死（Acute myocardial infarction , AMI）在發病率₪•✘╃、死亡率₪•✘╃、醫療費用方面是一個日益嚴重的問題··✘↟│。目前治療上的進步•│，AMI死亡率已降低一半•│，但臨床之外的死亡率仍然較高··✘↟│。各種AMI動物模型有助於我們對AMI的理解··✘↟│。

小鼠•│，兔子•│，狗•│，靈長類和其他動物已用於AMI模型的製備•│，但在實驗室大鼠主要用於製備AMI模型•│，如SD大鼠₪•✘╃、Wistar大鼠等··✘↟│。目前最常用的方法是左冠狀動脈結紮術（left coronary artery , LCA）•│，一種是永久性結紮LCA•│，另一種是LCA缺血後再灌注··✘↟│。LCA缺血後再灌注•│，短暫的阻塞通常是30min•│， 長時間的阻塞是60-90min•│，造成更大面積的梗死•│，更高的死亡率··✘↟│。兩種模型方法在麻醉₪•✘╃、手術過程₪•✘╃、處理和組織學方面都需要類似的技術··✘↟│。短暫的阻塞能檢查治療方法和結局；完全的阻塞•│，在AMI延遲發作時•│，有助於我們瞭解心肌重構•│，心血管結局•│，這時心肌挽救的可能性是有限的··✘↟│。永久結紮LCA術後的死亡率為10-50%•│，LCA缺血後再灌注損傷的死亡率要低得多··✘↟│。

永久性結紮LCA 24h後的心肌病理變化包括水腫和稀疏的心肌細胞浸潤明顯•│，心肌纖維變的更薄•│，間隔更大··✘↟│。LCA缺血30min後再灌注24h的心肌病理變化包括出血區•│，主要的多形核細胞浸潤•│，較少水腫•│，心肌纖維變薄•│，細胞浸潤增多··✘↟│。AMI引起的生化變化有ROS和RNS參與再灌注心臟的缺血後功能障礙•│，MDA聚集等··✘↟│。

研究模型

我們掌握了大鼠和小鼠急性心肌梗死模型的製備方法•│，以SD大鼠為例◕◕╃：麻醉大鼠•│，連上呼吸機•│，在第5肋間間隙•│，用一個蚊式止血鉗開啟胸膜和心包•│，用夾子略微開啟•│，縫合和結紮在距LCA起點約2-3 mm的位置··✘↟│。左心室前壁變得蒼白•│，結紮被認為是成功的··✘↟│。結紮後•│，立即手動排空空氣•│，關閉肌肉和胸腔皮膚··✘↟│。

我們掌握了大鼠和小鼠心肌細胞的原代分離方法•│，以SD大鼠為例◕◕╃：出生24h內的乳鼠•│，75%乙醇消毒皮膚•│，取出心臟•│，剪去心房和血管•│，剪碎心室•│，用0.014%膠原酶Ⅱ和0.05%胰酶消化6-7次•│，保留上清•│，直至組織塊消化完畢•│，離心•│，沉澱用10%胎牛血清的DMEM培養基重懸··✘↟│。放培養箱80min待心肌成纖維細胞貼壁後輕輕吹打培養基•│，收集上清•│，離心•│，加含有10%胎牛血清的DMEM培養基培養•│，即為心肌細胞··✘↟│。

研究案例

目的◕◕╃：研究異槲皮素對急性心肌梗死大鼠心肌梗死的保護機制和作用

結論◕◕╃：異槲皮素透過抗炎和抗凋亡因子以及調節TLR4 - NF -κB訊號通路來改善急性心肌梗死··✘↟│。

路線◕◕╃：

1. 異槲皮素改善急性心肌梗死大鼠心肌梗死麵積透過抑制炎症₪•✘╃、氧化應激和心臟細胞凋亡··✘↟│。

2. 異槲皮素增加急性心肌梗死大鼠內皮型一氧化氮合酶•│，降低誘導型一氧化氮合酶水平•│，抑制toll樣受體4核因子（TLR4 – NF）- κB訊號通路··✘↟│。

核心文獻

1.Rat models of myocardial infarction. Thromb Haemost. 2006;96(5)

2.Isoquercetin ameliorates myocardial infarction through anti-inflammation and anti-apoptosis factor and regulating