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神經元原代培養

簡要描述↟│☁₪↟: 神經元原代培養是將胚胎哺乳動物中樞神經系統的部分組織·•₪·,如大腦皮層◕☁▩、海馬◕☁▩、脊髓等腦組織直接取出·•₪·,再接種培養的方法✘↟✘。目前國內◕☁▩、外有關神經元培養的方法較多·•₪·,但在原代培養中神經元的純度和產量方面還存在一些亟待解決的問題✘↟✘。由於神經元是一種高度分化的細胞·•₪·,相對於其它細胞而言·•₪·,神經元在體外更難以存活和生長✘↟✘。因此·•₪·,體外培養神經元要求的培養方法和營養條件均較為特殊✘↟✘。

  • 更新時間↟│☁₪↟:2022-09-08 00:00:00
  • 訪  問  量↟│☁₪↟:2871

詳細介紹

實驗步驟

(1)75%酒精消毒孕鼠·•₪·,在無菌條件下取出胎鼠·•₪·,分離並切取脊髓·•₪·,置於冷的無鈣◕☁▩、鎂的HBSS液的平皿中( 下置冰袋);

(2)解剖顯微鏡無菌條件下仔細剝離脊膜及血管;

(3)用彈簧剪將脊髓剪成1cm3大小·•₪·,0.05%胰酶37℃消化15-20min·•₪·,每五分鐘振盪一次;

(4)去掉上清·•₪·,加入終止液終止消化·•₪·,吹打10-15次·•₪·,不能有氣泡·•₪·,收集上清·•₪·,剩餘組織再消化一次;

(5)4℃1000rpm離心10min·•₪·,棄上清·•₪·,加入種植液1重懸·•₪·,培養箱內差速貼壁30min;

(6)收集上清·•₪·,臺盼藍染色計數·•₪·,按6×10^5cells/孔種入六孔板(種植液1)·•₪·,37℃·•₪·,5%CO2·•₪·,95%飽和溼度的培養箱中培養;

(7)培養第二天·•₪·,全換液更換為種植液2;

(8)培養第四天·•₪·,半量換液加入5uM的阿糖胞苷·•₪·,24h全量換液;

(9)之後每週換液兩次✘↟✘。
 

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